BIOBASIC液相色譜柱的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
在液相色譜分離系統(tǒng)中,色譜填料選擇的正確與否會(huì)直接影響到專業(yè)的BIOBASIC液相色譜柱分離物質(zhì)效果的好壞。由于BIOBASIC液相色譜柱填料具有相當(dāng)寬的選擇范圍,所以我們?cè)谫徺IBIOBASIC液相色譜柱之前有必要對(duì)不同液相色譜填料進(jìn)行一個(gè)簡單的認(rèn)識(shí)和了解。
正相色譜硅膠基質(zhì)填料。BIOBASIC液相色譜柱的固定相是由硅膠和其他具有極性官能團(tuán)組成的鍵合相填料。其物質(zhì)分離特點(diǎn)是極性較弱組合zui先被色譜柱沖洗出來。而且正相色譜所使用的流動(dòng)相其極性要低于固定相,流動(dòng)相通常使用正乙烷和二氯甲烷等。
反相色譜硅膠基質(zhì)填料。反向色譜柱的填料是以硅膠材料為主要物質(zhì),并與極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)組成的鍵合相。其物質(zhì)分離特點(diǎn)是極性較強(qiáng)組合zui先被色譜柱沖洗出來,而極性弱的組分則會(huì)更強(qiáng)的保留在柱子上。反向色譜的流動(dòng)相的極性相對(duì)較強(qiáng),常配制有機(jī)緩沖液作為流動(dòng)相。目前較為常用的反相色譜填料有C4(B)、C8(MOS)以及C18(ODS)等。
聚合物填料。這種聚合物的填料一般是由聚甲基丙酸酯或者聚苯乙烯-二乙烯基苯組成。其特點(diǎn)是這種色譜柱的酸堿度適用范圍相對(duì)較廣,且疏水性很強(qiáng),但它的柱效相對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料要低一些。一般將這種大孔的基質(zhì)填料用于蛋白質(zhì)的分離。
其他無機(jī)填料。如石墨化碳對(duì)于酸堿度和溫度沒用嚴(yán)格的限制范圍,一般可對(duì)一些幾何導(dǎo)構(gòu)體進(jìn)行分離。此外還有氧化鋁以及氧化鋯等無機(jī)填料的應(yīng)用。
BIOBASIC液相色譜柱選擇的簡單思路:
1.確定分離目的確定你的應(yīng)用是否要求高分離度、短分析時(shí)間、高靈敏度、長柱壽命,低的操縱本錢等等。
2.評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)..諸如化學(xué)結(jié)構(gòu)、溶解性、穩(wěn)定性等等。
3.選擇合適的BIOBASIC液相色譜柱了解色譜填料的物理和化學(xué)性質(zhì)。