HYPERCARB液相色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑，如果和流動相不匹配，使用前需進行轉(zhuǎn)換。特別是流動村j含緩沖鹽時，如保存溶劑足純有機相或有機相比例高，直接將新柱接人使用，會導致緩沖鹽在柱內(nèi)結(jié)晶析出，造成柱頭堵塞。建議儀器和色譜柱經(jīng)常使用，用10%的有機溶劑保持即可。
日常分析工作中，我們使用的流動栩和待測樣品應(yīng)用0.45pm濾膜過濾后再連接或注入到色譜儀上。對于有機相比例高的流動栩可以一起過濾出來備用，但是有機相比例小的流動相一定要現(xiàn)用現(xiàn)濾，分析結(jié)束時一定要先用10%的有機溶劑沖洗管路及色譜柱，為有機相少的流動相容易滋生細菌，造成色譜柱堵寒，影響色譜柱性能。
短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動相(不含緩沖鹽)保存為佳，以盡量減少下次使用的平衡時間。一般只建議在長期保存反相柱的時候用純醇或乙腈，使用80%左右有機相保存也屬好的選擇，且足以避免長菌。強烈建議在柱身上貼標簽標明保存溶劑。離子交換柱和水性凝膠柱等適合保存在水溶液中的色譜柱，可加0.05%溶液防止K菌。正相柱無論是短期還足長期，都推薦保存住所用流動相巾。
HYPERCARB液相色譜柱選擇的方法和條件
?、偬盍匣|(zhì)
a.硅膠基質(zhì)：純度高本錢低，強度大，化學修飾輕易，但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。
b.聚合物基質(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬，溫度穩(wěn)定(高溫可以達到80度以上)，機械強度小。
?、陬w粒外形
大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒，但有時是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價格。
?、垲w粒粒徑
粒徑越小柱效越高、分離度越高，但同時會導致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
?、芎剂?br />
含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量進步柱容量、分辨率及分析時間，用于要求高分離度的復雜樣品;低含碳量分析時間短、展現(xiàn)不同的選擇性，用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
⑤孔徑和比表面積
HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒，盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi)。因此，分子必須進進孔內(nèi)才能被吸附和分離。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個概念?？讖叫”缺砻娣e大，反之亦然。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保存,上樣量和復雜成分的分離度;比表面積小，平衡時間快，適合梯度分析。
?、蘅兹莺蜋C械強度
孔容，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應(yīng)填料的機械強度?？左w積大的填料相對孔體積小的填料機械強度要略弱。孔體積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
?、叻舛朔舛?br />
封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對封端鍵合相會產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品。
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更新時間：2020-02-26 
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